Окраска мазков на трихомониаз

Содержание

Трихомониаз: лабораторная диагностика, методы диагностики трихомоноза

Окраска мазков на трихомониаз

Диагностика трихомониаза проводится с целью выявления микроорганизма Trichomonas vaginalis. Трихомониаз распространён среди мужчин и женщин, чья половая жизнь характеризуется сменой множества партнёров. Болезнь характеризуется наличием множества очагов, хроническим течением и наличием рецидивов.

Виды диагностики трихомоноза

Мочеполовой трихомониаз (трихомоноз) является самой распространенной урогенитальной инфекцией в мире. Более половины случаев обращения к венерологу связаны с этим заболеванием.

Чаще всего для выявления паразита применяется лабораторная диагностика трихомониаза. Исследование в лабораторных условиях является актуальным не только для болеющих, но также для выздоравливающих пациентов и бессимптомных трихомонадоносителей.

Чтобы окончательно подтвердить полное излечение, необходимо провести трёхразовую диагностику, каждый раз получая отрицательный результат. С этой целью применяются различные микроскопические, культуральные и серологические методы диагностики трихомониаза.

Микроскопические методы

Микроскопическая диагностика проводится через изучение взятого биологического материала из органов мочеполовой системы. Диагностика трихомониаза у мужчин осуществляется по образцам из половых желёз. Соскоб с уретры проводится после очистки выделений с головки пениса.

Взятый мазок помещается на предметное стекло

В случае с женщиной берётся соскоб из уретры и шейки матки. За день до взятия анализов женщины не должны спринцевать влагалище, а мужчинам не следует мочиться в течение нескольких часов до взятия биоматериала.

При хорошем образце могут быть видны трихомонады размером немногим более лейкоцитов. Спустя 2-3 часа трихомонады перестают шевелиться, поэтому важно проводить исследование взятых образцов сразу же. По движению жгутиков и ундулирующей мембраны можно определить наличие трихомонад.

Важно очистить образец от прочих бактериальных форм жизни, так как они, будучи прикреплёнными к лейкоцитам, могут создать ложное впечатление о наличии множества живых и подвижных трихомонад.

Окраска препаратов

Помимо нативных мазков параллельно изучаются и образцы (препараты), окрашиваемые по специальным методикам:

  1. Окраска метиленовым синим, после чего мазок высушивается и позволяет просмотреть овальные трихомонады между клеточной массой.
  2. Окраска эозином и метиленовым синим. Обычно применяется для анализа детского биологического материала. Позволяет рассмотреть посиневшие ядра трихомонад на фоне голубого клеточного материала.
  3. Окраска бриллиантовым зелёным. Применяется при отсутствии метиленового синего. Принцип тот же, видны зелёные ядра трихомонад на фоне светло-зелёных клеточных элементов.
  4. Окраска по способу Грамма. Кристаллический фиолетовый окрашивает образец через фильтрованную бумагу, после чего высушенный препарат покрывается нейтральным красным. В результате ядро приобретает фиолетовый или сиреневый цвет, а протоплазма становится красно-оранжевой, что позволяет увидеть паразитов.

Трихомонады, окрашенные в фиолетовый, под микроскопическим увеличением

Помимо диагностики трихомониаза таким же образом можно обнаружить и гонорею. Также следует обращаться внимание на такие вспомогательные признаки как наличие повышенного количества слизи во взятом мазке и небольшие скопления лейкоцитов поверх эпителиальных клеток.

Другие микроскопические методы

Помимо стандартного изучения образцов под микроскопом и методов окраски препаратов могут быть применены и другие способы. Метод фазово-контрастной микроскопии позволяет рассмотреть тела трихомонад даже при отсутствии красящих веществ, и применим такой способ даже к неподвижным паразитам.

Люминесцентнаямикроскопия в свою очередь основана на применении ультрафиолетовых лучей, позволяющих на тёмном фоне рассмотреть клеточные ткани образца и обнаружить в них наличие трихомонад.

Параллельное применение этого метода наряду со стандартными заметно повышает шансы точно установить наличие паразитов.

Как правило, использование микроскопических методов бывает достаточно, чтобы уверенно провести диагностику трихомониаза для лечения в клинике. Также проведение подобных диагностических процедур позволит обнаружить наличие другой возможной патогенной флоры во взятых образцах биологического материала.

Микроскопические исследование надо проводить сразу после взятия образца

Культуральный метод

Если клиническое течение болезни является нетипичным или заболевание перешло в хроническую стадию и не имеет на данный момент ярко выраженных симптомов, то может быть применён более долгосрочный и сложный метод культивирования патогенной среды в специальной питательной среде.

Наиболее популярны питательные среды 199-СДС, СГДС, СКДС. Приготовленные среды помещаются в пробирки объёмом 5 мл и запечатывают вазелиновым маслом. Используя пастеровскую пипетку, на дно пробирок заносят взятый бактериологический материал. При наличии болезни результаты появляются уже в течение первой недели.

Серологический метод

В большинстве случаев применяется в качестве вспомогательного метода диагностики. Серологические реакции не всегда точны по причине существования разных серотипов у трихомонад и невысокой иммуногенности паразитов. Тем не менее, положительные результаты остаются актуальными ещё в течении как минимум 1 года.

Как правило, серологическая диагностика основывается на реакции флюоресценции, иммуноферментном анализе, реакции связывания комплемента и реакции агглютинации. Антиген, применяемый в большинстве случаев, состоит из заранее выращенных трихомонад. К антигену добавляют сыворотку крови и говяжий бульон.

Ферментативная активность паразитов может сильно разниться от пробы к пробе, поэтому методы основанные на скорости разложения различных белковых соединений не получили большой популярности. Диагностику трихомониаза у женщин и мужчин надёжнее провести, используя традиционные методы визуального обнаружения тел паразитов.

Источник: https://101parazit.com/mikroorganizmy/trichomoniasis/laboratornaya-diagnostika-trihomoniaza.html

Трихомониаз: мазок

Окраска мазков на трихомониаз

Трихомонады – типичные простейшие, часть из которых способна вызывать поражения урогенитального тракта у людей обоего пола.

Трихомонас вагиналис обычно проживает и размножается у женщин, для которых более типично хроническое течение инфекции.

Женщины являются и резервуаром-носителем, от которого чаще заражаются мужчины.

Актуальны все виды половых контактов, кроме орального.

Трихомонада – единственный возбудитель половых инфекций, которым нельзя заразиться при оральном сексе.

Особенности возбудителя — наличие множества ферментов-протеаз.

Это позволяет ему закрепляться на клетках эпителия половых органов, внедряться в них и ускользать от защитных механизмов иммунитета человека.

В ответ на вагинальную трихомонаду слизистая отвечает воспалением, эрозированием, метаплазией, а в подслизистом слое образуются инфильтраты.

Помимо яркой клинической картины при вульвовагините или цервиците у женщин и уретрите у мужчин нередки и случаи носительства простейших, без явной клинической картины.

Проблема диагностики инфекции актуальна не только при заболеваниях урогенитального тракта, но и при носительстве.

Трихомонада не только ослабляет местную иммунную защиту и меняет общую реактивность организм своего хозяина.

Но и открывает ворота для сопутствующих венерических инфекций (гонококков, хламидий).

Нередко можно обнаружить у носителя трихомонад или больного трихомониазом ассоциации с другими возбудителями инфекций, передаваемых половым путем.

Классическая диагностика трихомониаза

Традиционно постановка диагноза трихомониаза связывается с микроскопией мазков.

Подобный диагностический поиск более полувека велся урологами, венерологами и гинекологами.

Ранее он был актуален для лиц обоего пола.

И сегодня взятие мазков на гонорею и трихомониаз – обязательная часть рутинного гинекологического обследования.

Однако, актуальность метода сегодня ставится под сомнение.

У женщин образцы для микроскопического анализа забираются при гинекологическом осмотре.

Источниками служат слизистая влагалища, мочеиспускательного и шеечного каналов.

Для здоровой женщины методики остаются безболезненными.

При наличии воспалительных изменений или эрозирования слизистых возможны небольшой дискомфорт и незначительные контактные кровотечения.

Они не требуют никаких мероприятий и проходят самостоятельно за несколько часов или суток.

Как делают микроскопию мазка на трихомониаз

Для забора материала соблюдается определенная последовательность: из мочеиспускательного канала, вагины, шейки матки.

  • Цервикальный материал забирается тампоном-щеточкой (для иммунофлюоресцентных микроскопий) или стандартным ватным тампоном, с которого пробу переносят на предметное стекло.
  • Из уретры забор предусмотрен тампоном или бактериологической петлей из пластика. Они вводятся на пару сантиметра и вынимаются с легким нажимом на стенки уретры. Полученный образец перемещают на предметное стекло, перекатывая по нему тампон, а петлю передвигают, слегка прижимая.
  • Когда подозревается трихомониаз, мазок из влагалища берется с использованием стерильного ватного тампона. При выборе участков забора мазка предпочтение отдается измененной слизистой или заднему своду влагалища. Для микроскопии пробу переносят с тампона на предметное стекло. С этой целью по стеклу тампон равномерно перекатывают. Затем мазок сушат и фиксируют, используя этиловый спирт. Стекло маркируется и направляется в лабораторию для микроскопии.

Мазок на трихомониаз у мужчин берется из мочеиспускательного канала с помощью урологического зонда, вводимого на 3-4 сантиметра.

При обратном движении зонд прижимается к стенкам уретры с целью собрать материал для микроскопии.

Для микроскопии используются обезжиренные предметные стекла, маркируемые по месту забора исследуемого материала.

Их после нанесения материала высушивают на воздухе и фиксируют с помощью 96% этилового спирта (1-2 капли на мазок).

В дальнейшем чаще всего применяется окраска по Грамму.

Позволяет отделять грамположительные микробы, окрашивающиеся в темно-фиолетовый цвет от грамотрицательных, принимающих малиновый цвет.

Микроскопию проводят в световом микроскопе.

Применяют метод иммерсии (вводя между объективом и предметным стеклом масляный раствор).

Это позволяет расширять видимую область и увеличивать яркость объекта. 

  • При окраске по Грамму трихомонады окрашиваются неоднородно. Ядро их приобретает фиолетовую, а протоплазма — оранжевую окраску.
  • В случае использования в качестве красителя метиленового-синего прокрашивает ядра в синий цвет.
  • Сочетание метиленового синего и эозина дает синие ядра и голубую цитоплазму.
  • Окраска по Папаниколау – более дорогой тест, который привычно используется для обнаружения новообразований цервикального канала. Для трихомонад методика обладает примерно 60% чувствительностью и 95% специфичностью.

Сравнительные характеристики микроскопий на трихомониаз

Желательно микроскопировать свежие неокрашенные мазки.

Так как трихомонады быстро теряют подвижность, через полчаса от забора материала достоверность микроскопического поиска снижается на треть.

Недостатком микроскопии становится погрешность визуального восприятия.

За трихомонады нередко принимаются клетки эпителия в состоянии вакуольной дегенерации.

Лучше поддаются верификации живые трихомонады.

Поэтому чем ранее материал попадает под микроскоп, тем выше процент удачных диагностических поисков.

Порядка 90% микроскопий материала в течение первых двух часов от его забора верны.

Чем позже от момента выполнения мазка проведено микроскопирование, тем ниже вероятность застать возбудителя в живых.

И достоверно сказать, имеет ли место инфицированность трихомонадой.

Играет роль и количество простейших в образце.

Поэтому у мужчин ПЦР всегда предпочтительнее микроскопии.

Так как в их уретре концентрация трихомонад обычно значительно меньше, чем в половых путях женщины.

Окрашивание мазков позволяет более детально изучить строение возбудителя, однако снижает чувствительность методики.

После применения анилиновых красителей успешное обнаружение трихомонады возможно лишь в 30-60 процентах случаев.

Нередко это связано с тем, что красители меняют привычную грушевидную форму инфекционного агента и затрудняют верификацию.

Предпочтительнее применение метиленового синего.

Это простая окраска, которая достаточно ярко прокрашивает ядра возбудителей и создает достаточную наглядность.

Другие варианты исследования мазков на трихомониаз

  • Фазово-контрастное микроскопирование даже без подкрашивания образцов позволяет выявить присутствие трихомонад.
  • Люминисцентная микроскопия основана на способности ультрафиолетовых лучей вызывать свечение предварительно обработанный люминофором (акридиновым оранжевым) клеток. Для обнаружения трихомониаза используется редко, так как методика трудозатратная и дорогая.
  • Сегодня появилась возможность более детально проводить анализ генетического материала возбудителя, с высокой точностью верифицируя именно данный вид инфекционного агента. Среди методик амплификации нуклеиновых кислот чаще всего пользуются полимеразной цепной реакцией. Материал для данного вида исследования забирают аналогично тому, как это делается для микроскопии. Но тканевые образцы помещаются не на предметные стекла, а в пробирки с жидкой средой, предназначенной для транспортировки. Методика позволяет выявлять целые цепочки или их обломки генома трихомонад, верифицировать их. И для мужчин, и для женщин, анализ показывает максимальную, стопроцентную специфичность и чувствительность.
  • Культуральные методики показывают высокую специфичность (100%) и чувствительность. Они предполагают транспортировку забранных образцов в пробирках со средами, перенос их на питательные среды и помещение в термостаты на период роста колоний. Для трихомонад актуальны агаровые среды. Разброс чувствительности методики довольно большой: от 40 до 96%. Играют роль качество транспортных и питательных сред, сроки и условия транспортировки образцов. Иногда требуется пересадка культуры микробов с одной среды на другую в связи с возможной задержкой роста трихомонад на сутки или более. В целом методика дорога, даже после внедрения систем типа пластикового конверта или InPouch TV.

Таким образом, посев мазка трихомониаз выявляют хуже, чем ПЦР и более информативны у женщин, чем у мужчин.

Диагностика микробных содружеств при трихомониазе

Довольно редко трихомонады становятся изолированной половой инфекцией.

Эти микроорганизмы способны захватывать и фагоцитировать клетки других возбудителей половых инфекций.

Способствуя развитию смешанного поражения урогенитального тракта.

Гибель лактобацилл в результате их растворения трихомонадами обеспечивает падение местной иммунной защиты в половых путях у женщин.

Нередко наряду с трихомонас вагиналис в мазках обнаруживаются гонококки, хламидии.

Они могут вызывать инфекционно-воспалительные процессы, устойчивые к антибактериальной терапии одним препаратом.

Удлиняют и усложняют диагностический поиск и лечение, а также делают их более дорогостоящими.

Мазок на гонорею и трихомониаз берется одновременно.

При этом методики амплификации нуклеиновых кислот (РНК и ДНК) забранных образцов предпочтительнее микроскопии.

Это связано также с тем, что входящие в бактериальное содружество спутники трихомонады могут не выявляться при микроскопическом исследовании.

Сегодня существуют методики определения чувствительности трихомонад к различным противопротозойным препаратам.

Так как возбудитель – факультативный анаэроб, то лекарственные средства тестируются как в присутствии воздуха, так и без него.

Такие диагностические пробы дороги и практического применения в обычных клиниках не имеют.

Как подготовиться к мазку на трихомониаз

Не так уж важно, какой врач назначает мазок.

Трихомониаз может быть успешно диагностирован по направлению уролога, венеролога или гинеколога.

Главное, не ошибиться с выбором диагностической методики и не допустить ошибок в подготовке к исследованию.

Можно обратиться в частную лабораторию, где делают большой спектр исследований на половые инфекции.

Можно обратиться и в клинику в системе ОМС, где сделать бесплатно можно мазки и цитологию.

Однако, посев мазка на трихомониаз – это не всегда стопроцентно достоверный анализ.

Нередко сомнительные результаты приходится перепроверять с помощью полимеразной цепной реакции.

Сроки ее выполнения занимают не более трех суток и могут быть сокращены до нескольких часов.

Цена избавления от трихомониаза в сжатые сроки, разумеется, перекрывает риски неточной диагностики бесплатными методиками.

Когда после заражения сдают мазок трихомониаз

Так как микроскопия выявляет живые подвижные клетки простейших, необходимо, чтобы они успели внедриться в клетки урогенитального эндотелия, в соскобе которых их и ищут.

Чаще всего положительные ответы микроскопии могут быть получены уже спустя семь-десять дней от заражения.

Подготовка, которую требует мазок на трихомониаз, предполагает:

  • Отказ от противомикробных средств на десять дней.
  • Отказ от местных антисептиков на двое суток.
  • Воздержание от мочеиспускания в течение двух часов до забора материал из уретры.

Серологическая диагностика трихомониаза

Сравнение мазка и крови на трихомониаз конечно перевешивает чашу весов на сторону серологических вариантов поиска.

Почему, например, нет симптомов, а в мазке обнаружено большое число трихомонад?

Не всегда дело в носительстве инфекции.

Нередко за трихомонады при визуальной оценке принимаются клетки эпителия.

Поиск же иммуноглобулинов в венозной крови, определение их титров в парных сыворотках дает количественное представление об иммунном ответе организма на присутствие трихомонад.

Это дает преимущество в установлении давности инфекционного процесса, предполагаемых сроках заражения.

Кровь для анализа забирается натощак из вены в лаборатории или процедурном кабинете.

Однако серология не является ведущей методикой в верификации диагноза трихомониаза.

Результаты мазка на трихомониаз

Когда проводится расшифровка, мазок трихомониаз описывается следующим образом: обнаружено или нет.

В случае, когда мазок показал трихомониаз, результат желательно перепроверить посредством ПЦР.

Что делать, если обнаружено инфицирование или имеется клиника трихомониаза, определяет врач.

Обычно ведется терапия с применением противопротозойных препаратов (метронидазола или тинидазола).

Мазок трихомониаз контрольный после лечения также целесообразно заменять ПЦР.

На сегодня выбор противотрихомонадных препаратов для системного и местного лечения не так уж широк.

Простейшее часто проявляет достаточную лекарственную устойчивость и способно выживать после курса терапии.

Связано это в первую очередь с нарушением проницаемости мембраны простейшего и его способностью захватывать из соседних клеток нитрогруппы, мешающие работе метронидазола.

Поэтому, проявляя устойчивость к лекарствам, микроорганизм может модифицироваться внешне, ограничивая удачную микроскопию.

Однако генетический материал (ДНК и РНК) возбудителя остаются прежним.

Это позволяет удачно верифицировать недолеченную инфекцию методами амплификации нуклеиновых кислот.

И назначать повторное или альтернативное лечение до полной стабилизации микрофлоры урогенитального тракта.

В целом, в задачи человека, заподозрившего у себя трихомониаз или другую половую инфекцию, входит незамедлительное обращение к профильному врачу.

Такая тактика позволит своевременно установить природу и характер патологических изменений мочевыводящих или половых путей.

И начать адекватное лечение инфекции.

Ни в коем случае недопустимо самолечение или использование народных методов.

Ценой несвоевременного или неадекватного лечения может стать не только хронизация инфекции, но и осложнения, включая бесплодие и половую несостоятельность.

Если вам необходимо сделать мазок на трихомониаз, обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

Источник: https://onvenerolog.ru/trixomoniaz/chto-takoe-trixomonady-v-mazke.html

Об унификации лабораторных методов исследования в диагностике гонореи и трихомониаза, Приказ Минздрава СССР от 12 июля 1985 года №936

Окраска мазков на трихомониаз

В советской лабораторной службе последовательно проводится унификация методов, наиболее часто применяемых в диагностической практике лабораторных исследований.

Внедрение в практику унифицированных методов, утвержденных приказами Министерства здравоохранения СССР в 1972-1981 годах, упорядочило работу клинико-диагностических лабораторий, способствовало совершенствованию лабораторного обеспечения клинической диагностики.

В целях дальнейшей унификации лабораторных методов исследования в клинико-диагностических и бактериологических лабораториях лечебно-профилактических учреждений страны

1. Утверждаю:

1.1. Перечень унифицированных методов клинико-диагностических и бактериологических исследований в диагностике гонореи и трихомониаза (приложение 1).

1.2. Методические указания по применению унифицированных клинико-диагностических и бактериологических исследований в диагностике гонореи и трихомониаза (приложение 2).

2. Приказываю:

2.1. Министрам здравоохранения союзных и автономных республик, начальникам Главных управлений здравоохранения Мосгорисполкома, Ленгорисполкома, Ташгорисполкома, Киевского горисполкома и Мособлисполкома, заведующим краевыми, областными, городскими и районными отделами здравоохранения:

2.1.1. Организовать, начиная с 1986 года, проведение лабораторных исследований в диагностике гонореи и трихомониаза во всех клинико-диагностических и бактериологических лабораториях, занимающихся диагностикой гонореи и трихомониаза, по унифицированным методам, утвержденным настоящим приказом;

2.1.2. Обеспечить освоение сотрудниками клинико-диагностических и бактериологических лабораторий унифицированных методов лабораторной диагностики гонореи и трихомониаза согласно приложению 2.

3. Контроль за выполнением настоящего приказа возложить на заместителя Министра здравоохранения СССР тов.Сафонова А.Г.

4. Разрешается размножение данного приказа в необходимом количестве.

Министр
С.П.Буренков

Приложение 1. Перечень унифицированных методов клинико-диагностических и бактериологических исследований в диагностике гонореи и трихомониаза

Приложение 1к Приказу Министерстваздравоохранения СССР

от 12 июля 1985 года N 936

1. Клинико-диагностические исследования

1.1. Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном метиленовым синим.

1.2. Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном эозином и метиленовым синим.

1.3. Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном бриллиантовым зеленым.

1.4. Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном по модифицированному способу Грама.

1.5. Обнаружение влагалищных трихомонад в исследуемом материале при изучении нативного препарата.

2. Культуральные исследования

2.1. Выделение и идентификация гонококков в культурах.

2.2. Выявление в культурах колоний гонококков, продуцирующих цитохромную оксидазу.

2.3. Идентификация гонококков в чистых культурах методом ферментации сахаров.

2.4. Определение чувствительности чистой культуры гонококка к антибиотикам.

2.5. Определение бета-лактамазной активности гонококков.

2.6. Выделение и идентификация влагалищных трихомонад в культурах.

Начальник Главного управлениялечебно-профилактической помощи

А.М.Москвичев

Приложение 2. Методические указания по применению унифицированных клинико-диагностических и бактериологических исследований в диагностике гонореи и трихомониаза

Приложение 2к Приказу Министерстваздравоохранения СССР

от 12 июля 1985 года N 936

Общие указания к унифицированным методам

В методических указаниях величины выражены в единицах Международной системы единиц (1, 2, 3).

При проведении исследований по унифицированным методам рекомендуется руководствоваться следующими указаниями:

– взвешивание на аналитических весах производят с точностью до 0,0002 г, на технических весах – с точностью до 0,01 г;

– для измерения объемов жидкости и приготовления растворов используют мерную посуду, соответствующую ГОСТам: ГОСТ 1770-74 – “Цилиндры, мензурки, колбы мерные” и ГОСТ 20292-74 – “Бюретки, пипетки”;

– под “холодной”, “прохладной” температурой подразумевают температуру 12° – 15°C; под “теплой” – 40° – 50°C; под “горячей” – 80° – 90°C; под “комнатной” – 18° – 20°C; под температурой “кипящей водяной бани” подразумевают температуру 98° – 100°C (4);

– если для растворов не указан растворитель, то подразумевают водные растворы;

– под названием “вода”, если нет особых указаний, следует понимать дистиллированную воду (4);

– для приготовления раствора реактивов используют дистиллированную воду, соответствующую ГОСТ 6709-72;

– используют химические реактивы, срок хранения которых не истек, а условия хранения и упаковка соответствуют ГОСТ на данный реактив или указаны на этикетке.

Растворы реактивов для унифицированных методов готовятся в объеме, приемлемом для данной лаборатории, в зависимости от стабильности растворов реактивов и числа проводимых исследований; для большинства реактивов указаны допустимые квалификации. В тех случаях, когда квалификация реактивов не указана, можно пользоваться реактивами квалификации ч, чда, или хч.

Для реактивов, которые не производятся отечественной промышленностью, квалификация не указана.

Правила приготовления растворов кислот и щелочей приведены в руководствах по технике лабораторных работ (5, 6).

Описание предварительных операций – очистка, мытье и сушка лабораторной посуды – приведено в соответствующих руководствах (5, 7).

В связи с переходом на Международную систему единиц концентрация растворов реактивов в унифицированных методах выражена в молярной (моль/л) или в массовой (г/л раствора) концентрации.

Литература

1. “Методические указания. Внедрение и применение” СТ СЭВ 1052-78 “Метрология. Единицы физических величин”. РД 50-160-79. М., Изд-во Стандартов, 1979.

2. Методические рекомендации по применению в клинической лабораторной диагностике наименований и обозначений единиц физических величин. М., 1977.

3. Единицы СИ в медицине. Подготовлено по предложению Тридцатой Всемирной ассамблеи здравоохранения. Женева, ВОЗ, 1979.

4. Государственная Фармакопея Союза Советских Социалистических Республик. Десятое издание. М., “Медицина”, 1968.

5. Воскресенский П.И. Техника лабораторных работ. М., “Химия”, 1966.

6. Карякин Ю.В., Ангелов И.И. Чистые химические реактивы. М., Госхимиздат, 1955.

7. Кац А.М., Канторович А.С. Мерные и дозирующие устройства для клинико-диагностических лабораторий. Л., “Медицина”, 1970.

1.1. Обнаружение гонококков и влагалищных трихомонад в исследуемом материале, окрашенном метиленовым синим

Принцип метода основан на обнаружении возбудителей в препаратах, окрашенных метиленовым синим.

Реактивы: 1) 1% водный раствор метиленового синего: 1 г метиленового синего растворяют в 100 мл дистиллированной воды, фильтруют через бумажный фильтр. 2) 96° этиловый спирт.

Специальное оборудование: микроскоп с осветителем, песочные часы, штативы.

Приготовление препаратов. Материал наносят на чистые обезжиренные предметные стекла тонким равномерным слоем, высушивают на воздухе.

Ход окраски. Препарат фиксируют 3 минуты в 96° этиловом спирте, высушивают, затем наносят на него 1% раствор метиленового синего на 1 минуту, тщательно смывают оставшийся краситель под струей холодной воды, высушивают в штативе.

Микроскопия. Исследование проводят под микроскопом с естественным или искусственным освещением: объектив 90 иммерсионный, окуляр 7 или 10. Иммерсионное масло: кедровое. Препарат синего цвета. Ядра клеток окрашены в синий цвет, протоплазма – в голубой цвет разной интенсивности (до бесцветной). Слизь голубого цвета. Бактериальная флора прокрашивается в синий цвет разной интенсивности.

Гонококки темно-синего цвета, резко очерчены, бобовидной формы, парные; располагаются внутриклеточно, в слизи и на эпителиальных клетках.

Влагалищные трихомонады различной формы (округлой, овальной, полигональной) расположены в слизи, между клеточными элементами: четко просматривается оболочка; ядро расположено эксцентрично, интенсивно окрашено в синий цвет; протоплазма нежная, сетчатая светло-синяя; вакуоли бесцветны.

Мазок на флору у женщин: таблица норм, расшифровка результатов, степени чистоты

Окраска мазков на трихомониаз

15.03.2017

42.3 тыс.

28.3 тыс.

7 мин.

Время чтения: 7 мин.

Лабораторные методы диагностики в акушерстве и гинекологии – важный компонент оценки состояния здоровья женского организма.

Среди их разнообразия особняком уже многие десятки лет стоит простой мазок на флору.

Другие его названия: мазок на степень чистоты, мазок на GN, гинекологический мазок, бактериоскопия отделяемого мочеполовых органов, микроскопия отделяемого из уретры, влагалища и шейки матки.

Это исследование позволяет оценить состав микрофлоры, подсчитать количество лейкоцитов и клеток эпителия, а также диагностировать некоторые ЗППП (гонорею, трихомониаз).

Это рутинный, неинвазивный, экономичный и достаточно информативный метод, широко распространенный в работе врача-гинеколога.

Основываясь на его результатах, врач имеет возможность определить дальнейшую тактику ведения пациента и назначить соответствующее лечение.

Как правило, мазок на флору берется при любом первичном обращении женщины к гинекологу.

Также показаниями к забору мазка и его последующей микроскопии являются:

  1. 1Плановые профилактические осмотры и диспансеризация.
  2. 2Патологические бели (отделяемое влагалища, шейки матки, уретры), неприятный их запах, обильный характер, изменение цвета.
  3. 3Предгравидарная подготовка в рамках планирования естественной и ЭКО-индуцированной беременности.
  4. 4Скрининг в период беременности.
  5. 5Неприятные, болезненные ощущения в нижней части живота, которые женщина не связывает с менструальным циклом.
  6. 6Болезненное мочеиспускание, дизурия, в том числе и симптомы уретрита, цистита. Урологическая патология у женщин, как правило, требует консультации и осмотра гинеколога.
  7. 7Окончание приема курса антибиотиков с целью определения характера флоры и возможностей ее восстановления.

2. Забор материала для исследования

Взятие гинекологического мазка возможно из трех точек: уретры (при необходимости), заднебокового свода влагалища и влагалищной части шейки матки.

Материалом для анализа служат влагалищные выделения, выделения из цервикального канала, отделяемое из уретры (по показаниям).

Вагинальные выделения многокомпонентны, в их состав входят:

  1. 1Слизь цервикального канала – нужна для проникновения сперматозоидов в полость матки и выше для оплодотворения. Ее густота зависит от уровня эстрогенов в организме женщины, по ее тягучести можно судить о фазе менструального цикла.
  2. 2Секрет желез наружных половых органов.
  3. 3Слущенный эпителий влагалища.
  4. 4Бактерии (влагалищная флора). В норме микрофлора в мазке представлена большим количеством молочнокислых бактерий (грамположительные палочки Додерляйна) и незначительным количеством условно-патогенной флоры (чаще всего кокковой).

2.1. Подготовка к забору мазка

Перед забором материала женщине необходимо соблюсти некоторые условия:

  1. 1Анализ лучше сдавать на 5-7 день менструального цикла. Во время менструации забор отделяемого не осуществляется.
  2. 2Исключить применение влагалищных свечей, лубрикантов, спринцеваний и половые контакты за 24 часа до исследования.
  3. 3Перед сдачей мазка не нужно использовать ароматизированные средства для интимной гигиены, туалет наружных половых органов лучше выполнить проточной водой.
  4. 4Нежелательно принимать горячую ванну в день сдачи анализа.

2.2. Техника получения материала

  • Мазок на флору берется строго до бимануального исследования, женщина находится на гинекологическом кресле.
  • Во влагалище вводится двустворчатое зеркало типа Куско, обнажается (выводится) влагалищная часть шейки матки.

  • Ориентируясь на нее, врач специальным шпателем проводит забор материала из заднебокового свода влагалища и переносит его на предметное стекло, которое после заполнения направления доставляется в лабораторию для микроскопического исследования.

  • Анализ из наружного отверстия уретры берется бактериологической петлей или ложкой Фолькмана. При наличии гноевидных выделений желательно взять именно их, слегка надавливая на наружное отверстие с внешней стороны.

  • Анализ с поверхности влагалищной части шейки матки берут шпателем Эрба.

3.1. Нормальная флора

В последнее время нормальному составу влагалищной микрофлоры стали уделять особое внимание, так как было доказано, что именно этот фактор обусловливает репродуктивное здоровье женщины, обеспечивает местный иммунитет, защиту от патогенных бактерий, нормальное наступление и течение беременности.

В норме 95% флоры у женщины составляют молочнокислые бактерии (иначе палочки Додерляйна, лактобациллы, лактобактерии).

В процессе своей жизнедеятельности лактобактерии перерабатывают гликоген, высвобождающийся из клеток эпителия, с образованием молочной кислоты. Именно она обеспечивает кислую среду влагалищного содержимого, которая мешает размножению факультативной и патогенной флоры.

У каждой женщины во влагалище обитает 1-4 вида лактобактерий, причем их сочетание сугубо индивидуально.

При расшифровке результатов анализа невозможно провести детальный анализ микрофлоры влагалища, лаборантом оценивается только соотношение палочек и кокков.

Отсутствие кокков и большое количество грамположительной палочковой флоры (++++) приравниваются к 1 степени чистоты влагалища. Это наблюдается достаточно редко, такая ситуация более характерна для контрольных мазков после санации влагалища или приема антибиотиков.

Незначительное количество кокков  (+, ++) считается нормой и свидетельствует о 2 степени чистоты, но лишь в том случае, если обнаружена и палочковая флора (++, +++). Это хороший мазок.

Патологическим считается увеличение количества кокков (+++, ++++) на фоне снижения количества палочек (+, ++). Такой результат называется 3 степень чистоты влагалища. Эта ситуация требует детального обследования.

Большое количество кокков (++++) и полное отсутствие грамположительных палочек (Грам + палочек) в мазке свидетельствуют о 4 степени чистоты. В этом случае женщине требуется обязательное лечение.

Подробнее о степенях чистоты влагалища можно читать здесь (перейдите по внутренней ссылке).

Таблица 1 – Нормальные показатели, оцениваемые при расшифровке результатов микроскопии мазка на флору и GN. Для просмотра кликните по таблице

3.2. Гонококки и трихомонады (Gn, Tr)

Гонококки –это микроорганизмы бобовидной формы, которые являются возбудителями гонореи. Они неустойчивы во внешней среде, но при попадании в человеческий организм окружаются специальной капсулой.

Главной причиной обращаемости пациентов при гонорее являются гнойные, обильные выделения из половых путей. Болезненность при мочеиспускании, неприятные ощущения в гениталиях возникают только у 50% женщин. Часто наблюдается латентное течение инфекции с тенденцией к хронизации и развитию вторичного бесплодия.

В норме в мазке на микрофлору и GN гонококки отсутствуют. Их выявляют при 100% -м наличии гонореи, что требует немедленного назначения терапии не только женщине, но и всем ее половым партнерам.

Также необходимо дополнительно обследовать всех членов семьи, в особенности детей, так как возможна передача инфекции через общие полотенца, ванную комнату, предметы личного пользования.

Влагалищные трихомонады – одноклеточные (простейшие) микроорганизмы, способные к движению за счет жгутиков и самостоятельной жизнедеятельности вне макроорганизма.

Во влагалищном содержимом возможно обнаружение Trichomonas vaginalis, которые являются причиной урогенитального трихомониаза. Преимущественный способ передачи урогенитального трихомониаза половой.

Попав на слизистую оболочку влагалища, трихомонады прочно закрепляются на поверхности эпителия и вызывают гибель клеток.

В ответ на влияние патогенов на слизистой оболочке развивается воспаление: появляются гиперемия (покраснение) и отек, петехии (мелкоточечные кровоизлияния), местная гипертермия (повышение температуры).

В норме трихомонад во влагалищном мазке на степень чистоты быть не должно. При их обнаружении необходимо специфическое лечение женщины и ее партнера, а также дополнительное обследование членов семьи, проживающих на одной территории (не исключается контактно-бытовой путь передачи инфекции).

3.3. Лейкоциты

Лейкоциты – это клетки крови, так называемые белые кровяные тельца, основной функцией которых является специфическая и неспецифическая защита организма. Лейкоциты делятся на несколько видов в зависимости от осуществляемой ими функции по отношению к чужеродным агентам: одни их распознают, другие доставляют, третьи уничтожают.

При микроскопии влагалищного мазка учитывается не вид лейкоцитов, а их общее количество. Повышение числа лейкоцитов в мазке показывает наличие воспалительного процесса.

Нормой лейкоцитов считают их обнаружение в количестве до 10 в поле зрения у небеременной женщины для влагалищного отделяемого.

При беременности за норму принимают до 20 лейкоцитов в поле зрения, что связано с физиологическим состоянием иммуносупрессии и повышенной нагрузкой на выделительную систему.

В отделяемом, взятом с влагалищной части шейки матки, допустим более высокий уровень  лейкоцитов – до 30 в поле зрения. В нормальном мазке из уретры количество лейкоцитов не превышает 0-5 в поле зрения.

Превышение нормальных значений (“плохой мазок”) может быть признаком:

3.4. Эпителиальные клетки

В репродуктивном периоде женщины при условии сохранения нормального гормонального фона поверхностные клетки слизистой оболочки влагалища регулярно слущиваются, отторгаются, благодаря чему поддерживается здоровое состояние не только самой слизистой, но и постоянство влагалищной среды.

Вместе с тем, при микроскопии гинекологического мазка всегда оценивают количество эпителиальных клеток в поле зрения. В норме их количество не превышает 10 в поле зрения лаборанта.

Уменьшение их количества может свидетельствовать:

  1. 1О гормональном дисбалансе: снижении эстрогенной насыщенности организма (гипоэстрогении), повышении уровня андрогенов.
  2. 2Атрофическом кольпите.

Превышение нормы является признаком:

3.5. Слизь

Слизь также является нормальной составляющей влагалищных выделений, входящей в состав секрета желез.

Если слизь в анализируемом мазке выявляется в небольшом (+) или умеренном (++) количестве, то это интерпретируют как норму.

В обязательном порядке слизь должна отсутствовать в материале, взятом из уретры. Если же ее объем значителен, следует подозревать наличие воспалительного процесса (чаще кольпита или цервицита), гормонального дисбаланса.

3.6. Ключевые клетки

Ключевыми называются клетки слущенного эпителия влагалища, по краю которого закреплены множество грамвариабельных бактерий, тонких палочек и кокков. При микроскопии они придают клетке неровный, зернистый вид.

В норме во влагалищном отделяемом женщины их быть не должно. Их наличие является специфическим маркером дисбиоза влагалища – бактериального вагиноза.

3.7. Дрожжеподобные грибы

Грибки рода Candida – одноклеточные микроорганизмы округлой формы. Влагалищная среда идеальна для их роста и развития за счет высокого содержания гликогена.

Но за счет конкурирующей лактобациллярной флоры при нормальном уровне иммунитета их активного роста не наблюдается. Для приобретения патогенных свойств грибкам рода Candida необходимы некоторые условия:

  1. 1Состояние иммуносупрессии,
  2. 2Наличие эндокринной патологии,
  3. 3Злокачественные новообразования,
  4. 4Период беременности, детский и пожилой возраст,
  5. 5Терапия глюкокортикостероидами.

В норме грибков в мазке на флору обнаружено быть не должно. В исключительных случаях допускается их единичное обнаружение в материале, взятом из заднебокового свода влагалища, как составляющей части факультативной флоры. При этом важно учесть наличие/отсутствие жалоб и клинических проявлений.

Обнаружение же спор и мицелия гриба в мазке свидетельствует о вагинальном кандидозе и требует соответствующего специфического лечения.

Хотя мазок на степень чистоты и является достаточно информативным диагностическим методом, он актуален только при сопоставлении результата микроскопии с жалобами и клиническими проявлениями.

Главным недостатком этого метода исследования является невозможность идентифицирования конкретного возбудителя заболевания. По результатам анализа мазка невозможно оценить уровень и глубину поражения тканей.

Поэтому при выявлении воспалительного процесса в мазке врач может назначить дополнительные методы диагностики, направленные на идентификацию возбудителя (ПЦР, «Фемофлор», бактериологическое исследование отделяемого мочеполовых органов и определение чувствительности к антибиотикам).

  1. 1Гинекология. Национальное руководство под ред. В. И. Кулакова, 2009 г.
  2. 2Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник для студентов медицинских вузов/ под ред. А. А. Воробьева. – 2-е изд. испр и доп.

    – М.: “Медицинское информационное агенство”, 2012 – 704 стр, ил., табл.

  3. 3О.А.Пустотина. Вагиниты, вызванные условно-патогенной микрофлорой: анализ международных и отечественных протоколов. Гинекология.

    2014; 5: 27-30

Источник: https://sterilno.net/gynecology/gynecological-diagnostics/mazok-na-floru-v-ginekologii.html

Поделиться:
Нет комментариев

    Добавить комментарий

    Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.